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淺看原代細(xì)胞分離的懸浮細(xì)胞分離方法

更新時(shí)間:2021-12-15      點(diǎn)擊次數(shù):758
 
  原代細(xì)胞分離是指將組織分散制成細(xì)胞懸液后從中獲取目的細(xì)胞的過程,獲得高純度、高活性的原代細(xì)胞則是很多細(xì)胞實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵要素之一。
  原代細(xì)胞是直接取自活組織(例如活組織檢查材料)的細(xì)胞,并建立用于體外生長(zhǎng)。這些細(xì)胞經(jīng)歷了非常少的群體倍增,因此與連續(xù)(腫瘤或人工永生化)細(xì)胞系相比,它們更能代表它們所衍生組織的主要功能成分,使得原代細(xì)胞成為更具代表性的體內(nèi)模型。
  所以,自己動(dòng)手分離原代細(xì)胞,是非常有必要的。
  原代細(xì)胞分離方法有許多種:懸浮離心法、直接組織塊法、酶消化法、非酶消化法、機(jī)械分散法等,今天,我們主要來看看常用的方法——酶消化法。
  原代細(xì)胞分離的懸浮細(xì)胞的分離方法:
  1、將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉(zhuǎn)至離心管中,1000rpm/分鐘離心5分鐘。
  2、去掉上清,離心沉淀用無鈣、鎂的PBS清洗后1000rpm/分鐘離心5分鐘。此步重復(fù)兩次。
  3、用培養(yǎng)基重懸,調(diào)整適當(dāng)細(xì)胞濃度后分瓶培養(yǎng)。
  4、如選用懸液中某種細(xì)胞,可采用離心后的細(xì)胞分層液收獲目的細(xì)胞。
  重點(diǎn)注意事項(xiàng):
  1、使用細(xì)胞分離酶時(shí),請(qǐng)注意溫度和濕度條件。如蛋白水解酶可以自動(dòng)分解,因此建議在使用前立即將其溶解,并在冰上保存2°C~8°C。
  2、通常用于細(xì)胞分離的大多數(shù)酶可以直接溶解于平衡鹽溶液或所選緩沖液中。對(duì)于許多細(xì)胞分離中,確保解離期間的組織存活,需要孵育培養(yǎng)基充分氧化并在生理pH下緩沖。95%O2、5%CO2平衡的介質(zhì)來完成。
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